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Wie wird die virale Hepatitis C diagnostiziert?


Wenn eine Labordiagnostik der viralen Hepatitis C erforderlich ist, berücksichtigt der Arzt notwendigerweise die folgenden wichtigen Faktoren:

  • die Anwesenheit oder Abwesenheit von Markern einer Infektion mit dem Hepatitis-C-Virus im Blut sowie andere Arten;
  • Leber-Enzym-Aktivitätsindikatoren;
  • Ergebnisse der klinischen Untersuchung des Patienten;
  • epidemiologische Geschichte.

Die Diagnose der Hepatitis C mit einem hohen Grad an Zuverlässigkeit erlaubt nur eine umfassende Aufzeichnung aller Daten (es sollte beachtet werden, dass die Diagnose von Hepatitis B auch durchgeführt wird). Für eine vollständige Diagnose des Virus führt man eine Reihe von Bluttests durch:

  • ein allgemeiner Bluttest;
  • biochemischer Bluttest;
  • PCR zur Bestimmung von Virus-RNA (PCR - Polymerase-Kettenreaktion);
  • Koagulogramm (Definition der Koagulierbarkeit von Blut).

Ultraschall der Bauchhöhle wird auch durchgeführt. Eine Punktionsbiopsie der Leber kann verordnet werden. Nur wenn alle Ergebnisse vorliegen, wird der Arzt eine genaue Diagnose stellen. Außerdem wird der Grad der Entwicklung des viralen Prozesses im Körper bestimmt, eine Beurteilung des Leberzustandes und des Grades seines Schadens wird vorgenommen. Der Arzt wird eine sichere und wirksame Behandlung wählen.

Diagnose der Virushepatitis C

Die Aufgabe des Arztes, die Prädisposition für virale Hepatitis C zu bestimmen, wird stark vereinfacht, wenn er Informationen über bereits bestehende Krankheiten und Untersuchungen hat.

Um die Funktionsfähigkeit der Leber zu überprüfen, muss diese untersucht werden. Dysfunktion in ihrer Arbeit zu identifizieren, wird helfen, Blut zu studieren. Unter der Annahme von Hepatitis C verschreibt der Arzt spezielle Studien, um Antikörper zu entdecken, die entwickelt werden, um diese ernste Krankheit zu bekämpfen.

Bei der Untersuchung von Blut wird das Hepatitis C-Virus im Blut direkt oder indirekt bestätigt, basierend auf RNA-vererbter Virusinformation (bestimmt durch PCR) oder wenn Antikörper im Blut nachgewiesen werden. Wird mittels PCR das Vorhandensein eines Virus im Blut der RNA bestätigt, deutet dies auf einen akuten Verlauf der Erkrankung hin.

In Gegenwart von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus gibt es zwei Möglichkeiten - entweder einen chronischen Krankheitsverlauf oder die Infektion wurde früher geheilt. Fakt ist, dass selbst nach vollständiger Heilung Antikörper lange im menschlichen Blut vorkommen.

Das heißt, die Labordiagnose umfasst die Abgabe eines Tests zum Nachweis von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus (wenn Hepatitis B diagnostiziert wird, werden Antikörper gegen diese Art von Virus bestimmt). Wenn das Ergebnis positiv ist, wird direkt nach dem Vorhandensein des Virus im Blut gesucht. Dazu wird die PCR-Polymerase-Kettenreaktionsmethode verwendet. Der PCR-Test ist besonders empfindlich, er wird speziell zur Bestätigung der Anwesenheit des Hepatitis-C-Virus im menschlichen Blut verwendet.

Aufgrund der Tatsache, dass Menschen mit C chronischer Hepatitis ist eine Blutprobe nehmen sehr hohe Wahrscheinlichkeit für das Auftreten von Leberkrebs, sie systematisch in regelmäßigen Abständen (sechs Monate bis ein Jahr) das Vorhandensein von Tumormarker für Leberkrebs, oder Alpha-Fetoprotein zu bestimmen. Genau zu den gleichen Zeitabständen wird eine Ultraschalluntersuchung der Leber durchgeführt.

Wenn die Testergebnisse positiv sind, das heißt, wenn die PCR-Analyse das Vorhandensein des Virus im Körper bestätigt, kann eine Leberbiopsie vom Arzt verschrieben werden. Mit diesem Verfahren können Sie sehen, wie häufig das Virus in der Leber vorkommt, und das Ausmaß seines Schadens bestimmen.

Wenn eine Biopsie durchgeführt wird, wird das Lebergewebe entnommen. Zur Analyse wird das Material mit einer speziellen Nadel aufgenommen. Ferner wird die resultierende Gewebeprobe einer Untersuchung unterzogen, die unter einem Mikroskop durchgeführt wird.

Für die Diagnose werden andere Verfahren wie CTG, Ultraschall vorgeschrieben. Sie werden verwendet, um Leberkrebs auszuschließen.

Der Bluttest wird auch durchgeführt, um die Art des Hepatitis-C-Virus oder seines Genotyps zu bestimmen, der den Körper einer kranken Person beeinflusst hat. Wenn es Daten über den Genotyp des Virus und den Bereich der Schädigung der Leber gibt, wird es für den behandelnden Arzt einfacher sein, die notwendigen Behandlungsmethoden zu finden.

Analyse für Hepatitis C

Es ist notwendig, Bluttests auf Hepatitis C zu prüfen und durchzuführen, einschließlich eines PCR-Tests, wenn:

  • Es gibt Symptome einer Lebererkrankung, zum Beispiel einen schlechten Bluttest;
  • Unsterile Spritzen wurden verwendet, auch wenn dies vor vielen Jahren geschah;
  • der Sexualpartner hat eine Krankheit wie Hepatitis C;
  • Hämodialyse wurde durchgeführt;
  • Die Behandlung verwendete Spenderorgane oder Blut, die vor 1992 erhalten wurden (nach diesem Jahr werden alle Spendermaterialien auf Hepatitis C getestet).

Achten Sie darauf, einen Bluttest für Hepatitis-C-Mitarbeiter medizinischer Einrichtungen weitergeben, die durch die Art ihrer Arbeit in Kontakt mit Spritzen, Blut und anderen Körperflüssigkeiten patsientov.Nuzhno darauf hingewiesen, dass es derzeit eine Gelegenheit, zu Hause getestet werden. Dazu wird ein spezieller Test verwendet, der in der Apotheke verkauft wird. Wenn Sie ein positives Ergebnis erhalten, sollten Sie sofort zu einem Arzt gehen und sich untersuchen lassen, um das Vorhandensein oder Fehlen des Virus im Körper festzustellen.

Bei der Diagnose von Hepatitis C wird der Arzt eine Behandlung verschreiben und Empfehlungen geben, um eine weitere Ausbreitung des Virus zu verhindern.

Medizinischer Insider

Medizinische Netzwerk Edition

Diagnose von Hepatitis C

Viele Menschen sind sich nicht bewusst, dass sie Hepatitis C-Antikörper-Test haben, ist der einzige Weg, um zu überprüfen, ob eine Person Hepatitis C hat Die Ergebnisse können nicht eindeutig sein, da ein positiver Test bedeutet nicht zwangsläufig, dass eine Person mit Hepatitis C.

Diagnose der Virushepatitis C

Für einen Test auf Antikörper gegen Hepatitis C wird eine Blutprobe benötigt. Antikörper ist ein vom Körper geschaffenes Protein zum Schutz vor Krankheitserregern und Krankheiten. Antikörper erkennen Substanzen, die gesundheitsschädlich sein können. Der medizinische Ausdruck für diese schädlichen Substanzen ist das Antigen. Wenn ein Antikörper ein Antigen erkennt, zerstört es es oder stoppt seine weitere Bewegung im Körper. Antikörper sind spezifisch für bestimmte Krankheitserreger oder Krankheiten, und sie bleiben im Körper, nachdem sich die Person infiziert hat. Dies bedeutet, dass Antikörper die Krankheit in der Zukunft bekämpfen werden.

Der Test prüft auf das Vorhandensein von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus.Wenn der Körper Antikörper hat, bedeutet dies, dass sobald eine Person mit einem Virus infiziert wurde. Dies bedeutet jedoch nicht immer, dass er immer noch diesen Erreger hat. Der Arzt wird eine Blutprobe entnehmen, die zur Untersuchung geschickt wird. Die Ergebnisse können mehrere Tage oder Wochen dauern.

Ergebnisse der Analyse für Hepatitis C

Es gibt zwei Testergebnisse für Hepatitis C-Antikörper.

Das Ergebnis ist nicht reaktiv oder negativ - es bedeutet, dass die Person keinen Virus hat. Eine Ausnahme ist, wenn sich eine Person kürzlich beispielsweise durch kontaminiertes Blut infiziert hat.
Ein reaktives oder positives Testergebnis bedeutet, dass die Person ein Virus hatte, aber das bedeutet nicht, dass er es noch hat. Weitere Tests werden benötigt, um zu überprüfen, ob der Virus aktiv ist.

Behandlung von Hepatitis C

Nach der Diagnose von Hepatitis C muss sich eine Person einer Reihe verschiedener Tests unterziehen, um zu sehen, wie das Virus den Körper befallen hat. Diese Tests werden auf Leberschäden hin überprüfen, bestimmen, wie gut die Leber funktioniert, und dem Arzt helfen, über die Behandlung zu entscheiden.
Hepatitis C wird mit antiviralen Medikamenten behandelt, die den Körper des Virus reinigen sollen. Ein weiteres Ziel des Medikaments ist es, Leberschäden zu verlangsamen. Dies wird die Wahrscheinlichkeit verringern, dass eine Person Leberkrebs oder schwere Vernarbung der Leber, bekannt als Zirrhose, entwickeln wird. Eine Person mit Hepatitis C sollte regelmäßig während der Behandlung getestet werden, um herauszufinden, wie wirksam das Medikament ist.

Hepatitis-C-Virus © www. public-domain-image.com

Labormethoden zur Diagnose von Hepatitis C

Nachdem eine Person ein reaktives oder positives Ergebnis für Hepatitis-C-Antikörper erhalten hat, muss sie sich zwei Kontrolltests unterziehen. Der erste Test prüft, ob die Person einen Virus hat; der andere misst die Menge des Virus im Blut.

PCR-Diagnose von Hepatitis C

Das erste Kriterium ist ein qualitativer Test für die Replikation des Cp-Gens, auch bekannt als PCR-Diagnose. Ein positives Ergebnis bedeutet, dass die Person ein Hepatitis-C-Virus hat, ein negatives Ergebnis zeigt an, dass der Körper das Virus ohne Behandlung zerstört hat.
Der zweite Test ist ein quantitativer Test für die RNA-Replikation. Der Test vergleicht die Menge des Virus im Körper vor, während und nach der Behandlung. Je geringer die Menge des Virus im Blut ist, desto höher ist die Wahrscheinlichkeit, dass eine Person das Virus aus seinem Körper entfernen kann.
Nach der Diagnose von Hepatitis C können weitere Tests erforderlich sein:
Tests auf Hepatitis A und B. Wenn eine Person diesen Formen des Virus zuvor noch nicht ausgesetzt war, muss sie geimpft werden.

Test für den Nachweis eines Stammes von Hepatitis C. Es gibt drei häufige Stämme, und jede Behandlung ist etwas anders.

Test auf Leberfunktion, der auf Entzündung oder Leberschäden prüft.

Risikofaktoren für Hepatitis C-Infektion

  • HIV;
  • Nadeln zum Injizieren von Drogen;
  • Vorhandensein eines Sexualpartners mit chronischer Hepatitis C;
  • Organtransplantation oder Blutspende bis 1992;
  • Arbeit in der öffentlichen Gesundheit;
  • Hämodialyse ist ein Prozess, der Blut filtert.

Menschen, die zwischen 1945 und 1965 geboren wurden, leiden fünfmal häufiger an dem Virus. Es ist unklar, warum sie eine höhere Hepatitis-C-Infektion haben als der Rest der Bevölkerung. Forscher glauben, dass dies auf den Standard der medizinischen Praxis in der Vergangenheit vor der Einführung der Infektionskontrolle zurückzuführen sein könnte.

Hepatitis-C-Virus kann erhebliche Schäden für den Körper verursachen. Je früher das Virus erkannt wird, desto höher ist die Wahrscheinlichkeit seiner Behandlung. Personen, die Risikofaktoren ausgesetzt sind oder sich in einer Hochrisikogruppe befinden, sollten getestet werden.

Labordiagnostik der Virushepatitis C, B, A

Virale Hepatitis - infektiöse entzündliche Lebererkrankung, die am häufigsten in der Welt der Pathologie unter anderem Leberläsionen. Je nach Art der viralen Hepatitis Diagnose der Krankheit auf der Grundlage klinischer Symptome und Laborbefunde. Eine sorgfältig recherchierte Krankengeschichte und epidemiologische Geschichte spielen eine wichtige Rolle. Es gibt verschiedene Formen der Virushepatitis im Hinblick auf Erreger Vielzahl von klinischen Manifestationen, Verlauf und die Schwere der Erkrankung. Die Labordiagnostik der viralen Hepatitis ist in vielen Fällen die einzige Methode, mit der Sie die Krankheit genau bestimmen können. Zur Zeit identifiziert und untersuchte verschiedene Arten von Viren mit hepatotropic Aktion (A, B, C, D, E), die ähnliche Krankheitsbild verursachen. Von - für malosimptomno und Schwierigkeiten bei der Diagnose von Hepatitis C, wird es als die schwerste alle bekannten Arten sein.

Virale Hepatitis A

Es hat einen fäkal-oralen Übertragungsweg, was es zu einer weitverbreiteten Infektion macht. Die Diagnose von Hepatitis A ist nicht sehr schwierig. Die Inkubationszeit ist relativ kurz - von 7 bis 50 Tagen; gekennzeichnet durch einen scharfen Beginn: Es gibt hohes Fieber, ein ausgeprägtes asthenisches Syndrom, Schmerzen in allen Gelenken - klinisch ähnelt die Grippe. Dauer der Krankheit - 1 Monat. Der leichte Krankheitsverlauf erfordert manchmal keine besonderen therapeutischen Maßnahmen, es gibt Fälle von Selbstheilung.

Virale Hepatitis B

Für den subklinischen Fluss ist die Labordiagnostik der Hepatitis B die einzige genaue Methode zur Überprüfung der Diagnose - das Virus bestimmt das Antigen des Virus und die Antikörper gegen das Erregerprotein sowie die HBV-DNA. Übertragungswege:

  • parenteral - durch das Blut;
  • sexuell - durch Sperma;
  • vertikal: von der Mutter zum Fetus (durch die Muttermilch wird das Virus nicht auf das Kind übertragen).

Infektion eingenommen bei der Verwendung von schmutzigen Nadeln (eine Nadel Süchtiger verwenden) durch Werkzeuge (bei chirurgischen Eingriffen, tätowiert, Akupunktur, Ohr-Piercing, Maniküre, Pediküre), bei Bluttransfusionen. Die Latenzzeit beträgt 2 Monate bis 6 Monate. Die Symptome ähneln dem Beginn der Virushepatitis A: das grippeähnliche Syndrom entwickelt sich, es gibt einen Schmerz im ganzen Körper und in den Gelenken, schwere Schwäche, Unwohlsein. Manchmal gibt es Hautausschläge. Die Prognose für eine akute Hepatitis ist relativ günstig: In 80% der Fälle tritt eine Besserung ein. Die subklinische Form der Erkrankung nimmt oft einen chronischen Verlauf an - eine vollständige Heilung ist in solchen Fällen selten möglich.

Gleichzeitig wird in vielen Fällen der Krankheit ein Hepatitis-B-Satellit, das Virus D (delta), das die virale Hepatitis D verursacht und den Verlauf der Grunderkrankung verschlimmert, identifiziert.

Virale Hepatitis E auf klinische Symptome ähnelt HAV, aber hat einen allmählichen Beginn und ist viel gefährlicher für schwangere Frauen.

Manifestationen von HCV

Die Labordiagnose der Hepatitis C (HCV) im Labor ist besonders wichtig, da sie etwa 3% der Weltbevölkerung betrifft. Jedes Jahr steigt die Inzidenz - dies ist mit einem stetigen Anstieg der Drogensucht in der Welt verbunden.

Achtung bitte! Virale Hepatitis C ist eine der gefährlichsten und schwersten Formen der infektiösen Leberschädigung. Er wird wegen des subklinischen Flusses für eine lange Zeit als "sanfter Killer" bezeichnet und dann als schneller Zirrhose-Fall mit einem möglichen tödlichen Ausgang. Die Kombination von HCV mit anderen Formen von infektiöser Hepatitis erhöht signifikant den Krankheitsverlauf und beschleunigt den tödlichen Ausgang.

Akutes HCV ist asymptomatisch und wird daher selten diagnostiziert. Wenn es möglich ist, die Krankheit in dieser Phase zu identifizieren, dann kann mit dem rechtzeitigen Beginn der Behandlung in 20% Heilung kommen.

HCV wird am häufigsten in chronischer Form in seinen späten Stadien beobachtet. Die Chronisierung des Prozesses erfolgt in 50% der Fälle.

Bei asymptomatischem Transport von Virus C werden Leberzellen allmählich geschädigt, Fibrose entwickelt sich. In der Zukunft, wenn es keine rechtzeitige Behandlung gibt, erhöht sich das Risiko von Leberzirrhose oder Leberkrebs.

Die Diagnose der Virushepatitis in einer ihrer Formen basiert auf der Definition:

  • der Erreger und seine Replikation;
  • Marker der Infektion.

Diagnostische Methoden umfassen immunochemische und molekularbiologische Reaktionen, die zeigen:

  • Antigene des Pathogens;
  • Antikörper gegen das Virus;
  • Nukleinsäuren.

Die Struktur des C-Virus

Virus C (BC) hat eine einzelsträngige RNA in seinem Genom. Er ist der einzige unter den Erregern der viralen Hepatitis mit einer solchen Struktur. Sowohl der Träger als auch der Patient können nicht über den Virus erraten, den sie haben. Für die Erkennung von Erkrankungen mit unklarer Diagnose sind daher eine Reihe von Studien und diagnostischen Tests erforderlich.

Das Genom des Virus C (seine RNA) besteht aus 10.000 Nukleotidbasen. Eine solche hohe Heterogenität bestimmt die Eigenschaften von HCV. Bei der Untersuchung der Nukleotide der RNA wurden signifikante Unterschiede in ihrer Struktur aufgedeckt. Unter Berücksichtigung der offenbarten strukturellen Merkmale wurde eine Klassifizierung von HCV erstellt, nach der:

  • Optionen (es gibt 6 - 9 von ihnen);
  • Subtypen;
  • Genotypen.

Einige von ihnen sind in allen Ländern ohne Ausnahme, einige - lokal in bestimmten Regionen. Beim Eindringen in den Körper wird das Virus C in eine Kette von Nukleotiden des RNA-Moleküls eingefügt. Es mutiert ständig (mutiert), und eine Person kann Träger von 50 Subtypen desselben Genotyps des Virus werden. Das Immunsystem hält nicht mit der schnellen Mutation Schritt: Antikörper werden für eine Gruppe des Virus produziert, die Krankheit wird chronisch.

Definition des C-Virus

Die Diagnose von HCV ist mit dem Aufkommen der Molekularbiologie Realität geworden. Dies erklärt sich durch den extrem niedrigen Gehalt des Virus im Blut, der es nicht erlaubt, seine Antigene mit früheren Methoden zu isolieren.

Bei Verdacht auf HCV zielt die Labordiagnose auf Folgendes ab:

  • Antikörper (IgG, IgM) durch ELISA (Enzymimmunoassay);
  • RNA-Virus mittels PCR (Polymerase-Kettenreaktion).

Achtung bitte! Serologische Marker für Hepatitis C sind RNA-HCV und Antikörper, die im Körper gebildet werden.

PCR - Definition des Hepatitis C-Virus

RNA-HCV bezieht sich auf frühe Marker von HCV: sein Auftreten im Blut tritt 10 bis 12 Tage nach der Infektion auf, d. H. Viel früher als der Anstieg der Aminotransferasen (AST, ALT, GGT). Der Nachweis von RNA-HCV zeigt eine aktive Replikation (Multiplikation) des Virus an. Dies ist der "Goldstandard" der Diagnose, denn er klärt und bestätigt die Diagnose sogar zu einem Zeitpunkt, wenn die Symptome der Krankheit praktisch nicht vorhanden sind. Zur Überwachung der Ergebnisse von ELISA sollte eine PCR durchgeführt werden. Es wird in qualitativen und quantitativen Varianten durchgeführt.

Die Viruslast wird für PCR> 800 Tausend IE / ml oder 2 Millionen Kopien / ml als hoch angesehen; niedrig - mit PCR

Achtung bitte! PCR ist nicht nur eine qualitative Analyse (Nachweis von RNA-Virus), sondern bestimmt auch die Anzahl der Kopien von RNA in 1 ml Blut. Dies spielt eine wichtige Rolle bei der Festlegung einer wirksamen Behandlung und Bewertung des Therapieerfolgs. Wenn die RNA von Virus C im Blutplasma nachgewiesen wird, deutet dies auf eine akute Phase der Erkrankung hin. Das Ausmaß des Leberschadens und die Ausbreitung von pathologischen Veränderungen - Fibrose und Entzündung - wird nach einer Biopsie aufgedeckt. Diese Methode ist die informativste und zuverlässigste in der Diagnose. Die Manipulation ist für den Patienten völlig harmlos und dauert einige Sekunden.

ELISA - Nachweis von Antikörpern gegen das Virus

Das menschliche Immunsystem produziert Antikörper (IgG, IgM) gegen das Pathogen, wenn ein infektiöses Agens eindringt. Die gebildeten Immunglobuline bilden einen starken Komplex mit einem fremden Protein (mit dem Antigen des Virus), dessen quantitative und qualitative Parameter während des ELISA bestimmt werden. Bezieht sich auf eine indirekte Untersuchungsmethode: Während der Untersuchung wird das Virus nicht nachgewiesen, aber die Immunantwort des Organismus auf das infektiöse Agens, das eingetreten ist, tritt auf. ELISA wird zur Früherkennung durchgeführt und überwacht den Prozess in seiner Dynamik.

Antikörper werden in 80% der infizierten nur bis 5 - 6 Wochen nach dem Ausbruch der Krankheit, in 90% - bis 12 Wochen nachgewiesen. Manchmal geben diese Tests falsche positive Antworten. Für solche Fälle gibt es spezielle Tests - das Spektrum der Antikörperproteine ​​wird nach der Methode des rekombinanten Immunoblots bestimmt.

Um zuverlässige Ergebnisse zu erzielen, werden die PCR- und ELISA-Tests zweimal mit einer bestimmten Zeitspanne durchgeführt. In der Regel beträgt der Zeitraum 6 Monate.

Taktiken der Beobachtung

Um die Aktivität des Prozesses in der Leber zu klären, um die Taktik der Behandlung zu bestimmen, werden hepatische Tests bestimmt:

  • Bluttransaminasen (ALT, AST, GGT);
  • Gesamtbilirubin und seine Fraktionen;
  • alkalische Phosphatase (AFP);
  • Gesamtprotein mit Fraktionen.

Abhängig von den Ergebnissen der Laborstudien werden verschiedene Taktiken des Patientenmanagements verwendet:

  • Bei normalen Zahlen steht der Patient unter der Aufsicht eines Arztes. Bei Veränderungen im Gesundheitszustand werden die Tests wiederholt.
  • Bei einem Anstieg von 2 oder mehr Mal wird ELISA an Anti-HCV durchgeführt.
  • Wenn der Enzymimmunoassay positiv ist, wird eine PCR-Polymerase-Kettenreaktion verwendet, die zur Auswahl einer antiviralen Therapie führt.
  • Bei erhöhter 2-fach oder mehr Indikatoren der Leberproben, aber eine negative ELISA oder durch Leberproben 2-fach, positive IFA und PCR-negative dynamische Überwachung weiterhin mit zunehmender Inspektion und Kontrolle des Blut biochemischer Tests 1 alle 3 Monate.
  • Bei hohen biochemischen Parametern werden positive Ergebnisse von ELISA und PCR durch klinische Diagnose durchgeführt, ein antiviraler Wirkstoff wird ausgewählt und die Behandlung wird kontrolliert.

Erforschung biochemischer Indikatoren

Basierend auf den Ergebnissen eines biochemischen Bluttests wird der Grad der Aminotransferasen geschätzt.

  • ALT - Alanin-Aminotransferase - ist ein Teil der Hepatozyten. Bereits ein leichter Überschuß der Norm weist auf die bestehende Hepatitis (einschließlich Virus) in den frühen Stadien hin.
  • AST - Aspartat-Aminotransferase: Wenn ihr Spiegel den ALT überschreitet, ist dies der Indikator für die beginnende Fibrose (Bindegewebsvermehrung).

Hohe Werte von ALT, AST im Blut sind das Ergebnis von Nekrose der Leberzelle. Sie sind ein indirekter Indikator für die Aktivität des Entzündungsprozesses. Wenn das Niveau ALT die Norm um das 3-fache übertrifft, so handelt es sich um die minimale Aktivität, in 3-10 Male - die mäßige Aktivität des entzündlichen Prozesses, mehr als 10 Male - die Hepatitis mit der hohen Aktivität.

Das AST-Niveau ändert sich und mit anderen Pathologien wird ALT als spezifischer für Lebererkrankungen angesehen.

  • Eine Erhöhung des Gesamt- und Direktbilirubins tritt mit erhöhter Bildung oder verzögerter Ausscheidung aus dem Körper auf. Virushepatitis tritt bei einer Verletzung der Ausscheidung von Bilirubin auf. Die mukosale Ikterus und Sklera werden bei Bilirubinspiegeln über 30-35 mmol / l beobachtet, mit weiterer Ansammlung von gelber Haut. In chronischer Folge passiert dies nicht.
  • Die Zunahme von alkalischer Phosphatase (AFP), Gamma-Glutamintransferase (GGT), Cholesterin und Gallensäuren ist charakteristisch für das Syndrom. Aber Lebererkrankung ist nicht der einzige Grund für ihren Anstieg.
  • Der Albuminanstieg ist mit einer eingeschränkten Leberfunktion verbunden.

Klinische Diagnose

Für Virushepatitis C ist durch klinische Manifestationen angezeigt. Chronischer Verlauf von wenigen Symptomen gekennzeichnet: gestörte Unwohlsein und Müdigkeit gegen Ende des Tages erhöhte Toleranz gegenüber gewöhnlicher körperliche Aktivität reduziert. In normalen biochemischen Analysen sind solche klinischen Manifestationen selten mit viraler Hepatitis assoziiert. Unfolded klinisches Bild erscheint in den späteren Phasen: es Teleangiektasien und Leber „Stern“, hepato - und Splenomegalie, Ikterus der Lederhaut, Haut und Schleimhäute von Mund, Juckreiz der Haut (mit einem sehr hohen Niveau von Bilirubin im Blut), dunkler Urin, verfärbten Kot, Blutungen, Gewichtsverlust, Leberpalmen.

Achtung bitte! Bei einer chronischen Form von HCV kann sich Leberkrebs mit hoher Wahrscheinlichkeit entwickeln, so dass das Blut in regelmäßigen Abständen (einmal alle sechs Monate) auf On-Markern und Alpha-Fetoproteinen untersucht werden muss.

Ultraschalluntersuchung

Neben den Labormethoden gibt es weitere Erhebungsmethoden, die eine wichtige Rolle bei der Diagnose von HCV spielen. Dazu gehören Ultraschalluntersuchungen. Mit dieser Untersuchungsmethode wird der Zustand der Bauchorgane untersucht. Die Größe, Dichte, Struktur, Lage der Organe sind bestimmt, voluminöse Formationen, Konkremente, Verletzung des Abflusses der Galle, die Größe des Portals und der Milzvene werden aufgedeckt. Splenomegalie, Hepatomegalie, Vergrößerung der Pfortader deuten auf Hepatitis mit Übergang zur Zirrhose hin. Weitere Untersuchung, Serodiagnose ist notwendig, um virale Hepatitis C auszuschließen oder zu bestätigen

Fibroscanning und andere Tests

Die Methode der indirekten Diagnose, das Äquivalent der Biopsie - Fibroscanning (Elastometrie): nicht-invasiv, sicher, kann wiederholt durchgeführt werden, um die Therapie zu steuern. Hinweise für die Durchführung der Elastometrie sind pathologische Prozesse in der Leber vermutet, einschließlich - das Vorhandensein des Virus.

Es gibt auch viele diagnostische Tests, die eine Alternative zur Leberbiopsie sind. Tests ermöglichen es, das genaue morphologische Bild des betroffenen Organs, bestehende Fibrose, Steatose, Nekrose oder Entzündung zu bestimmen. Einige von ihnen:

  • FibroTest - mit seiner Hilfe eine umfassende Analyse von 5 biochemischen Indikatoren und rechtzeitige Diagnose von Fibrose-Stadien.
  • ActiTest - bestimmt 6 biochemische Indikatoren und ermöglicht es, Nekrose-Entzündungsprozess in der Leber zu diagnostizieren.

Achtung bitte! Die Prognose von HCV hängt von der rechtzeitigen Diagnose, vom Grad der Infektion und vom Wunsch des Patienten ab, geheilt zu werden. Moderne therapeutische Methoden mit dem Einsatz von antiviralen Medikamenten ermöglichen es, die Krankheit zu heilen oder eine langfristige Remission zu erreichen, das Leben zu verlängern und seine Qualität bei einer infizierten Person oder Träger zu verbessern. Die virale Hepatitis C ist trotz der schwierigen Diagnose und längerer Behandlung kein Urteil. Es ist notwendig, sich rechtzeitig an einen Arzt zu wenden, um eine qualitativ hochwertige medizinische Versorgung zu erhalten und alle seine Zwecke sorgfältig zu erfüllen.

Virale Hepatitis C

Hepatitis C - virale infektiöse Lebererkrankung übertragene Transfusion, gekennzeichnet durch einen leichten, oft subklinischen, weniger oft mäßigen Verlauf in der Primärinfektionsphase und eine Tendenz zu Chronisierung, Zirrhose und Malignität. In den meisten Fällen hat Hepatitis C einen ikterischen, symptomarmen Beginn. In dieser Hinsicht kann es für mehrere Jahre unerkannt bleiben und zeigt sich, wenn sich im Lebergewebe bereits eine Zirrhose entwickelt oder eine maligne Umwandlung in ein hepatozelluläres Karzinom auftritt. Die Diagnose von Hepatitis C wird als ausreichend begründet beim Nachweis von viraler RNA im Blut und Antikörpern gegen diese als Ergebnis wiederholter Studien durch PCR und verschiedene Arten von serologischen Reaktionen angesehen.

Virale Hepatitis C

Hepatitis C - virale infektiöse Lebererkrankung übertragene Transfusion, gekennzeichnet durch einen leichten, oft subklinischen, weniger oft mäßigen Verlauf in der Primärinfektionsphase und eine Tendenz zu Chronisierung, Zirrhose und Malignität. Virale Hepatitis C wird durch ein RNA-haltiges Virus der Flaviviridae-Familie verursacht. Die Tendenz dieser Infektion zur Chronisierung wird durch die Fähigkeit des Erregers bestimmt, lange Zeit im Körper zu bleiben, ohne intensive Manifestationen der Infektion hervorzurufen. Wie der Rest der Flaviviren vermag das Hepatitis-C-Virus sich zu vermehren und bildet Quasi-Stämme mit einer Vielzahl von serologischen Varianten, die verhindern, dass der Körper eine adäquate Immunantwort bildet und die Entwicklung eines wirksamen Impfstoffes nicht erlaubt.

Hepatitis-C-Virus vermehrt sich nicht in Zellkulturen, was es unmöglich macht, seine Stabilität in der äußeren Umgebung im Detail zu untersuchen, aber es ist bekannt, dass es etwas stabiler ist als HIV, es stirbt bei Bestrahlung mit ultravioletten Strahlen und kann einer Erwärmung auf 50 ° C standhalten. Das Reservoir und die Quelle der Infektion sind kranke Menschen. Das Virus ist im Blutplasma von Patienten enthalten. Infektiös wie unter akuter oder chronischer Hepatitis C leiden, und Menschen mit asymptomatischer Infektion.

Der Mechanismus der Übertragung von Hepatitis-C-Virus ist parenteral, es wird hauptsächlich durch das Blut übertragen, aber manchmal kann eine Infektion auftreten und in Kontakt mit anderen biologischen Flüssigkeiten: Speichel, Urin, Samen. Voraussetzung für eine Infektion ist der direkte Eintrag einer ausreichenden Menge des Virus in das Blut eines gesunden Menschen.

In der überwiegenden Mehrheit der Fälle tritt zur Zeit eine Infektion mit der gemeinsamen intravenösen Anwendung von Arzneimitteln auf. Die Verbreitung von Infektionen unter Drogenabhängigen erreicht 70-90%. Menschen, die Drogen nehmen die gefährlichsten in Bezug auf die Quelle der Epidemie der Virushepatitis C. Darüber hinaus sind, ist das Risiko einer Infektion bei Patienten erhöht, die medizinische Versorgung in Form von mehreren Bluttransfusionen, chirurgische Eingriffe, die parenterale Injektion und Einstich mit unsterilen wiederverwendbar erhalten. Die Übertragung kann mit der Anwendung von Tattoos, Piercings, Schnitte bei Maniküre und Pediküre, Manipulationen in der Zahnmedizin durchgeführt werden.

In 40-50% der Fälle ist es nicht möglich, den Infektionsweg zu verfolgen. In medizinischen Berufsgruppen übersteigt die Inzidenz von Hepatitis C nicht die der Bevölkerung. Die Übertragung von der Mutter auf das Kind wird durchgeführt, wenn sich eine hohe Konzentration des Virus im Blut der Mutter ansammelt oder wenn das Hepatitis-C-Virus mit dem menschlichen Immunschwächevirus kombiniert wird.

Die Möglichkeit, Hepatitis C mit einem einzigen Schlag einer kleinen Anzahl von Krankheitserregern im Blutkreislauf eines gesunden Menschen zu entwickeln, ist gering. Sexuelle Übertragung der Infektion ist selten, vor allem bei Menschen mit HIV-Infektion, anfällig für häufige Veränderungen der Sexualpartner. Die natürliche Anfälligkeit einer Person gegenüber dem Hepatitis-C-Virus hängt weitgehend von der empfangenen Dosis des Erregers ab. Postinfektiöse Immunität ist nicht gut verstanden.

Symptome der Virushepatitis C

Die Inkubationszeit der viralen Hepatitis C reicht von 2 bis 23 Wochen, manchmal bis zu 26 Wochen (was auf den einen oder anderen Übertragungsweg zurückzuführen ist). Die akute Phase der Infektion in der überwiegenden Mehrheit der Fälle (95%) manifestiert sich nicht durch schwere Symptome, die in der subkutanen Variante mit Gelbsucht ausbrechen. eine Zeit, trotz bestehenden Infektion Antikörper gegen den Erreger fehlt oder Titer von unmeßbar klein - später serologischer Diagnose von Hepatitis C kann mit einer Wahrscheinlichkeit von „immunologischen Fenstern“ in Verbindung gebracht werden. In 61% der Fälle wird Virushepatitis nach 6 Monaten oder mehr nach den ersten klinischen Symptomen diagnostiziert.

Klinisch manifestiert sich die Manifestation der viralen Hepatitis C in Form allgemeiner Symptome: Schwäche, Apathie, verminderter Appetit, schnelle Sättigung. Es kann lokale Zeichen geben: Schwere und Beschwerden im rechten Hypochondrium, Verdauungsstörungen. Fieber und Intoxikation bei Virushepatitis C sind ziemlich seltene Symptome. Körpertemperatur, wenn sie steigt, dann zu subfebrilen Werten. Die Intensität der Manifestation dieser oder anderer Symptome hängt oft von der Konzentration des Virus im Blut, dem allgemeinen Zustand der Immunität, ab. Gewöhnlich ist die Symptomatologie unbedeutend und die Patientinnen neigen nicht dazu, die Wichtigkeit zu bemerken.

Bei der Analyse von Blut in der akuten Phase von Hepatitis C wird oft ein niedriger Gehalt an Leukozyten und Blutplättchen festgestellt. In einem Viertel der Fälle ist eine kurzfristige leichte Gelbsucht festzustellen (oft beschränkt auf Sklerose und biochemische Manifestationen). Später, mit chronischer Infektion, begleiten Episoden von Ikterus und erhöhte Aktivität von Lebertransferasen Exazerbationen der Krankheit.

Schwerer Verlauf der viralen Hepatitis C wird in nicht mehr als 1% der Fälle beobachtet. In diesem Fall können sich Autoimmunerkrankungen entwickeln: Agranulozytose, aplastische Anämie, periphere Nervenneuritis. Mit einem solchen Strom ist ein tödlicher Ausgang in der prä-infantilen Periode möglich. In normalen Fällen verläuft Virushepatitis C langsam, ohne signifikante Symptome, seit Jahren nicht diagnostiziert und manifestiert sich sogar mit einer signifikanten Zerstörung von Lebergewebe. Häufig wird zum ersten Mal bei Patienten Hepatitis C diagnostiziert, wenn bereits Zeichen einer Leberzirrhose oder Leberzellkrebs vorliegen.

Komplikationen der Virushepatitis C sind Zirrhose und primärer Leberkrebs (hepatozelluläres Karzinom).

Diagnose der Virushepatitis C

Anders als bei Hepatitis B, das Virusantigen freigesetzt werden kann, die klinische Diagnose von Hepatitis-C-Virus, hergestellt durch serologische Methoden (IgM Antikörper gegen das Virus wird bestimmt durch ELISA und RIBA) und Bestimmen Virus-RNA in Blut mittels PCR. In diesem Fall wird die PCR zweimal durchgeführt, da die Wahrscheinlichkeit einer falsch positiven Reaktion besteht.

Beim Nachweis von Antikörpern und RNA kann von ausreichender Zuverlässigkeit der Diagnose gesprochen werden. Die Bestimmung von IgG im Blut kann sowohl das Vorhandensein eines Virus im Körper als auch die zuvor übertragene Infektion bedeuten. Patienten mit Hepatitis C sind zur Durchführung von biochemischen Leberuntersuchungen, Koagulogrammen, Ultraschall der Leber und in einigen komplexen diagnostischen Fällen - Leberbiopsie - beauftragt.

Behandlung der viralen Hepatitis C

Die therapeutische Strategie für Hepatitis ist das gleiche wie bei der Virushepatitis B: Diät buchstabierte №5 (limit Fette, insbesondere feuerfeste, bei normalen Verhältnis von Proteinen und Kohlenhydraten), mit Ausnahme der Produkte, die die Sekretion von Galle und Leberenzymen (salzig, geröstet, Konserven stimulieren ), Sättigung der Diät mit lipolytischen Wirkstoffen (Ballaststoffe, Pektine), eine große Menge an Flüssigkeit. Alkohol ist vollständig ausgeschlossen.

Spezifische Therapie der Virushepatitis ist die Ernennung von Interferon in Kombination mit Ribavirin. Die Dauer des therapeutischen Kurses beträgt 25 Tage (wenn die Variante des Virus resistent gegen antivirale Therapie ist, kann der Kurs auf 48 Tage verlängert werden). Als Vorbeugung von Cholestase sind therapeutische Maßnahmen komplexe Präparate ursodeoksiholievoy Säure und als Antidepressivum (als psychologische Zustand der Patienten wirkt sich häufig auf die Effizienz der Behandlung) - ademetionine. Die Wirkung der antiviralen Therapie hängt direkt von der Qualität der Interferone (Reinigungsgrad), der Intensität der Therapie und dem Allgemeinzustand des Patienten ab.

Den Indikationen entsprechend kann die Basistherapie durch orale Entgiftung, Antispasmodika, Enzyme (Mezim), Antihistaminika und Vitamine ergänzt werden. Bei schwerer Hepatitis C ist eine intravenöse Entgiftung mit Lösungen von Elektrolyten, Glucose, Dextran indiziert, ggf. wird die Therapie mit Prednisolon ergänzt. Bei Komplikationen wird der Behandlungsverlauf durch geeignete Maßnahmen (Behandlung von Leberzirrhose und Leberkrebs) ergänzt. Falls erforderlich, Plasmapherese herstellen.

Prognose für Virushepatitis C

Bei richtiger Behandlung sind 15-25% der Fälle abgeschlossen. Meistens wird Hepatitis C zu einer chronischen Form, die zur Entwicklung von Komplikationen beiträgt. Der Tod mit Hepatitis C tritt normalerweise aufgrund von Leberzirrhose oder Leberkrebs auf, die Letalität beträgt 1-5% des Falles. Die Prognose einer Koinfektion mit Hepatitis B- und C-Viren ist weniger günstig.

Prävention von Virushepatitis C

Gemeinsamer Hepatitis-C-Präventionsmaßnahmen umfassen die sorgfältige Einhaltung der Hygieneregime in medizinischen Einrichtungen, Qualitätskontrolle und Sterilität von Bluttransfusion und Sanitär der Beaufsichtigung von Einrichtungen Dienstleistungen für Menschen mit traumatischen Verfahren (Tätowieren, Piercing) bereitstellt.

Unter anderem werden Sensibilisierungs- und Bildungsaktivitäten unter Jugendlichen durchgeführt, individuelle Vorbeugung wird beworben: Safer Sex und das Verlassen von Drogen, medizinische und andere traumatische Verfahren in zertifizierten Institutionen. Unter Drogenabhängigen werden Einwegspritzen verteilt.

Labordiagnose von Hepatitis C

MI Michailow, Institut für Epidemiologie und Mikrobiologie. NF Gamalei RAMS, Moskau

Bei der Diagnose "Hepatitis C" müssen die folgenden wichtigsten Faktoren berücksichtigt werden:

  • Aktivitätsindikatoren für "hepatische" Enzyme;
  • Vorhandensein oder Fehlen von Markern einer Infektion mit dem Hepatitis-C-Virus (HCV) und anderen hepatotropen Viren;
  • epidemiologische Geschichte;
  • Ergebnisse der klinischen Untersuchung des Patienten. Nur eine umfassende Darstellung dieser Faktoren ermöglicht es, diese Krankheit mit hoher Zuverlässigkeit zu diagnostizieren. Der Laborant sollte objektive Informationen über das nachgewiesene Spektrum an viralen Antigenen und Antikörpern sowie HCV-RNA liefern, die es dem Kliniker, dem Bluttransfusions-Service-Offizier und dem Epidemiologen ermöglichen, die Probleme zu lösen, mit denen sie konfrontiert sind. Meistens ist es:
  • Identifizierung von Personen mit HCV zur Verringerung der Hepatitis C nach der Transfusion;
  • die Diagnose und Differenzierung der akuten und chronischen Hepatitis C;
  • Krankheitsprognose;
  • Ernennung, Bewertung und Prognose der Wirksamkeit der Therapie;
  • die Breite von HCV in der Bevölkerung und in verschiedenen Bevölkerungsgruppen untersuchen.
    Zur gleichen Zeit sind die Hauptarbeitsbereiche von Laborpersonal:
  • Entwicklung und Auswahl der aussagekräftigsten Methoden zum Nachweis von HCV-Infektionsmarkern;
  • die Definition von Kriterien für eine objektive Bewertung der erzielten Ergebnisse;
  • Entwicklung optimaler Algorithmen zur Durchführung von Laboruntersuchungen;
  • Einführung eines Systems zur Verbesserung des Nachweises von HCV-Infektionsmarkern.

    Die Grundlage der Labordiagnose von Hepatitis C HCV dient Wissen über seine Replikation, Informationen über die Dynamik von Erscheinen und Verschwinden von Infektionsmarker sowie moderne immunochemischen und molekularbiologischen Methoden zum Nachweis von Antigenen, Antikörpern und Nukleinsäuren.

    VIRUSHEPATITIS C. Das HCV wurde erstmals 1988 identifiziert, als eine Gruppe von Forschern um M. Houghton und Choo Q.L mit neuen molekularbiologischen Untersuchungsmethoden das Virusgenom klonierte und sequenzierte [1]. Ein Partikel des Hepatitis-C-Virus hat eine Kugelform mit einem mittleren Durchmesser von etwa 50 nm [2,3]. Versuche, die Struktur des Hepatitis-C-Virus zu visualisieren und zu untersuchen, wurden seit der Entdeckung des Virus gemacht, aber es gibt immer noch keine gut dokumentierten Ergebnisse dieser Studien, die auf die Schwierigkeit zurückzuführen sein können, Viruspartikel in den erforderlichen Mengen zu akkumulieren.

    VGSedinstvenny Mitglied der Gattung Hepacivirus in der Flaviviridae-Familie, die Viren wie dem Virus Stieren Durchfall und Schweinepest (Genus Pestivirus) und Gelbfiebervirus, Dang-Virus und GB-Virus enthält: GBV-A, GBV-B und GBV-C / HGV (die Gattung Flavivi-Rus). Die Struktur des Hepatitis-C-Virus kann wie folgt dargestellt werden (Schema Nr. 1). Das Nukleokapsid besteht aus dem RNA von mit einer Lipidhülle beschichtet C-Virus-Nucleocapsid oberer hepatitis darin ausgesparte Hüllproteine ​​durch den HCV-RNA kodiert. Das Genom des Virus wird durch ein einzelsträngiges lineares RNA-Molekül positiver Polarität mit einer Länge von etwa 9600 Nukleotiden dargestellt. Die Organisation des HCV-Genoms ähnelt anderen Flaviviren. Es unterscheidet zwei Zonen, die für strukturelle und nicht-strukturelle (funktionelle) Proteine ​​kodieren. Gene, die für Strukturproteine ​​kodieren, sind in der 5'-Region des Virus-Genoms und nicht-strukturell in der 3'-Region lokalisiert. Das Gen von HCV weist einen einzigen offenen Leserahmen (ORF), ein einzelnes Polypeptid (ungefähr 3000 Aminosäuren), die unter der Wirkung von zellulären und viralen in strukturelle und nicht-strukturellen Proteine ​​geschnitten Proteasen.

    Abb. 1. Strukturelle Elemente von HCV

    Strukturproteine ​​umfassen Proteine, die von Core, El und E2 mit HCV-RNA-Zonen codiert werden. Drei Formen von HCV-C-Protein wurden identifiziert: die Gesamtlänge (p21) mit einer Molekülmasse von 21 kD, die verkürzte (p19) und die (p16) -Form, die in den Nukleolen von infizierten Hepatozyten gefunden wurde. Auf seiner Oberfläche trägt das C-Protein verschiedene hochkonservierte B-Zell-Epitope, deren Existenz für den Nachweis von HCV-Antikörpern im Rahmen der Labordiagnostik von Hepatitis C äußerst wichtig ist.

    Die RNA-Regionen von HCV-E1 und E2 codieren Proteine ​​mit einem Molekulargewicht von 31 und 70 kD. Diese Proteine ​​haben mehrere N-Glykosylierungsstellen; Im E1-Protein wurden bis zu 6 dieser Stellen und in E2 - 11 identifiziert. Informationen über ein kleines Protein, p7, wurden in Abschnitt E2 gefunden, der nicht in der Virusstruktur gefunden wurde.

    Die Bezeichnung von Regionen, die näher am 3'-Ende der HCV-RNA liegen - als Zonen, die Informationen über nicht-strukturelle Proteine ​​des Virus enthalten - zeigt an, dass diese Proteine ​​keine strukturellen Komponenten des Viruspartikels sind. In der Nicht-Struktur-Zone wird HCV-RNA als NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A und NS5B bezeichnet. Die meisten Proteine, die von nicht-strukturellen Zonen der HCV-RNA codiert werden, sind für die Replikation des Virus notwendig.

    Die vergleichende Analyse von Nukleotidsequenzen der RNA von HCV-Isolaten, die in verschiedenen Regionen der Welt und sogar während der Krankheit von demselben Patienten erhalten wurden, zeigte das Hauptmerkmal dieses Virus - die hohe Heterogenität der RNA. Die Bestimmung der signifikanten genetischen Variabilität von HCV-RNA bildete die Grundlage für Theorien, die erklären: langfristiger (manchmal lebenslanger) Transport des Virus, häufige Entwicklung einer chronischen Krankheit, Schwierigkeiten bei der Therapie und die Schaffung wirksamer Impfstoffpräparate. Die signifikantesten Unterschiede in HCV-RNA-Sequenzen konzentrieren sich auf den N-terminalen Teil der E2-Region, der als "hypervariable Region" (HVR) bezeichnet wird [4].

    Derzeit gibt es 6 Hauptgenotypen und über 100 Subtypen von HCV. Die Genotypen 1a, 1c, 2a, 2c, 2c und 3a machen mehr als 90% der HCV-Isolate aus, die in Amerika, Europa, Russland, China, Japan und Australien / Neuseeland [5] gewonnen wurden. Die Genotypen 4, 5a und 6 sind in Zentral- und Süd-Afrika, Südostasien aufgezeichnet. In Russland und den GUS-Ländern wurde die Prävalenz des Genotyps 16 (nicht weniger als 68,9%) aufgezeichnet [6,7]. Es wird angenommen, dass Patienten, die mit Genotyp 1 (insbesondere 1c) infiziert sind, schlechter auf Behandlung ansprechen als Patienten, die mit anderen Genotypen des Virus infiziert sind.

    Patient HCV zirkuliert als eine Population von Viruspartikeln, deren Genome voneinander unterscheiden sich um 1-2% (kvazispetsifichnosti) als Folge von Mutationen, die während einer Infektion und / oder hergestellt in den Patienten während der Infektion akkumulieren. Diese mutierten Formen können stärker zur Verfügung stellen oder die Replikation kann das Virus helfen, die Immunantwort zu umgehen und möglicherweise das Ergebnis einer akuten Infektion beeinflussen, sind die Unterschiede im Verlauf der Krankheit und die Antwort auf IFN [8].

    BESTIMMUNG VON ANTI-HCV. Nach der Entdeckung von HCV-Virus und seine Rolle bei der Entwicklung von Hepatitis nach der Trans bestimmen - „weder A noch B“ wurden die Forscher herausgefordert Methoden zu entwickeln, die mit HCV und eignen sich für die Diagnose von akuter und chronischer Hepatitis C des Erfassens Es hat sich gezeigt, dass die HCV-Antigene zirkulieren in extrem niedrige Konzentrationen, und es ist offensichtlich, dass das methodische Niveau der späten 80er Jahre des 20. Jahrhunderts, das zum Nachweis viraler Antigene verwendet wurde, eindeutig unzureichend war.

    Im Jahr 1989 führte eine Gruppe von Forschern der Firma „Chiron Corporation“ unter der Leitung von Q-L.Choo die Klonierung von HCV-RNA und war immunoreaktiv Oligopeptide, die mit zirkulierenden Antikörpern im Blut von Patienten mit chronischer Hepatitis „weder A noch B“ reagieren. Diese Oligopeptide wurden zur Grundlage für diagnostische Medikamente zum Nachweis von HCV-Antikörpern. Dies hat schnelle Fortschritte bei der Entwicklung und Herstellung von diagnostischen Produkten festgestellt. Das Hauptverfahren zum Nachweis von Anti-HCV verwendet wurde, war das Enzym-linked Immunosorbent Assay als ein Verfahren, das die Anforderungen der Praxis erfüllt Gesundheit -TE Hohe Empfindlichkeit, Spezifität und einfache Handhabung.

    Da HCV weiterhin besteht im Blut von Patienten mit akuter und chronischer Hepatitis C in Verbindung mit anti-HCV diagnostische Produkte konzentrieren konzentrierte Entwickler auf die Schaffung von Testsystemen zum Nachweis von Antikörpern stellt die möglichst vollständige Identifizierung von Trägern des Virus, und so früh wie möglich Diagnose einer akuten Infektion. Die Vielfalt von Antigenen und Antigen-Determinanten kodiert durch die strukturelle und nicht-strukturelle HCV-RNA-Zone, die Richtung für diese Anordnung in der Gestaltung von diagnostischen Präparaten bestimmt und Oligopeptide verwendet, um sie zu erstellen. Seit dem Zeitpunkt der Entdeckung von HCV wurden diagnostische Systeme von drei Generationen erstellt (Tabelle 1).

    Tabelle 1
    Diagnostika zum Nachweis von Anti-HCV [9]

    Die verwendeten Peptide
    Zonen von HCV-RNA, in denen
    Sie sind codiert

    % Erkennung von Trägern
    HCV

    Zeit des ersten
    identifizieren
    Anti-HCV aus
    frühe Gelbsucht

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Kern
    C200 NS3 und NS4
    NS3p NS3
    C 100-3 NS4

    C22-3 Kern
    C200 NS3 und NS4
    NS3p NS3
    Peptid NS5

    Die Einführung zusätzlicher Peptide, hauptsächlich c22-3 (Core), in diagnostische Medikamente der 2. und 3. Generation erlaubte die Hauptaufgabe zu lösen, dh die Sensitivität, Spezifität und vor allem die Nachweisbarkeit von Anti-HCV zu erhöhen. Dank der Diagnosekurven der dritten Generation können bis zu 97% der HCV-Träger nachgewiesen werden. Gleichzeitig wurde eine definitive Diskussion durch die Einführung eines Peptids, das durch die NS5-HCV-RNA-Region codiert wurde, in ein Diagnostikum veranlasst. Nach Ansicht einiger Forscher ist die Anwesenheit dieses Peptids nicht von grundlegender Bedeutung für die Verbesserung der Qualität des diagnostischen Medikaments. [10,11]. Antikörper gegen NS5 können jedoch zu einem früheren Zeitpunkt der Infektion nachgewiesen werden, was die Qualität der Labordiagnose einer akuten Hepatitis C verbessert. [12]

    Gegenwärtig werden diagnostische Vorbereitungen der dritten Generation in der ganzen Welt verwendet, einschließlich in Russland. Peptide in diagnostischen Präparaten durch rekombinante Technologie erhalten (z.B. Diagnose Firmen: "Diagnosemittel", Nizhny Novgorod, "Vektor", Novosibirsk, "Roche"; "Abbott" et al.) Oder synthetische ( 000 MC "Avicenna", St. Petersburg, "Organon", etc.). Die Diagnostik, bei der beide Arten von Peptiden gleichzeitig verwendet wurden, erhielt Bezeichnungen als Präparate der 4. Generation. Aufgrund ihrer Eigenschaften haben diese Medikamente keine signifikanten Unterschiede. Vergleichende Tests, die regelmäßig vom Gesundheitsministerium Russlands durchgeführt wurden, zeigten eine vergleichbare Sensitivität von diagnostischen Präparaten in- und ausländischer Hersteller.

    Es wurde festgestellt, dass die Verwendung von diagnostischen Arzneimitteln der dritten Generation zum Nachweis von Anti-HCV unter immunkompetenten Populationen (zum Beispiel Blutspendern) auf 98,8-100% geschätzt wird. Gleichzeitig ist diese Zahl bei immunkompromittierten Personen, wie beispielsweise Patienten nach Nierentransplantation, Knochenmark oder HIV-infizierten Personen, signifikant niedriger - 50 bis 95% [12]. S. George et al. [13] zeigten, dass 8,4% der Patienten mit HIV-Infektion falsch-negative Ergebnisse beim Nachweis von Anti-HCV haben. Und bei solchen Patienten kann im Verlauf der Beobachtung ein Sero-Reversion-Effekt aufgezeichnet werden; Registrierung eines positiven Ergebnisses nach der seronegativen Anti-HCV-Periode [14].

    Eines der wichtigsten Probleme bei der Durchführung von Studien auf das Vorhandensein von Anti-HCV sind falsch positive Ergebnisse. Ihr Auftreten kann auf die unspezifische Wechselwirkung der Reaktionskomponenten, mögliche Kreuzreaktionen mit anderen viralen Antigenen und viele andere Faktoren zurückzuführen sein. Das Ausmaß der falsch-positiven Ergebnisse beim Nachweis von Anti-HCV mit verschiedenen diagnostischen Arzneimitteln kann 10-20% erreichen [15, 16]. Ein erhöhtes Ausmaß dieser Ergebnisse wurde bei Patienten mit onkologischen und Autoimmunerkrankungen, Personen mit Immundefizienzzuständen und Patienten mit Syphilis beobachtet [16, 17]. Das Vorhandensein von Fehlalarmen führt dazu, dass der Laborant sie vom echten Nachweis von Anti-HCV unterscheidet. Um dieses Problem zu lösen, wird das Serum im Blutserum von HCV-RNA nachgewiesen. Das negative Ergebnis des Nachweises von HCV-RNA erlaubt jedoch nicht, über das Vorhandensein eines falsch-positiven Nachweises von Anti-HCV zu sprechen. Es sollte berücksichtigt werden, dass Anti-HCV isoliert im Blut eines Patienten zirkulieren kann, der sich von akuter Hepatitis C erholt hat (10-15%) oder der HCV-RNA als Ergebnis der fortlaufenden Therapie eliminiert hat.

    BESTÄTIGUNGS (ZUSÄTZLICHE) TESTS. Zur Unterscheidung von falsch-positiven Proben und Proben, die tatsächlich Antikörper gegen HCV enthalten, wurden zusätzliche (ergänzende) Tests entwickelt. Die am häufigsten in diesen Tests Immunoblot Prinzip [z verwendet - RIBA-Test ( "Ortho-Clinical Diagnostics"); „LiaTek HCV“ (Organon Teknika)], wenn sie auf eine Nitrocellulosemembran in Form von einzelnen Streifen-Antigenen durch die verschiedenen Zonen der HCV-RNA codiert adsorbiert. Anti-HCV interagiert mit adsorbierten Antigenen mit enzymmarkierten Antikörpern gegen humanes IgG, gefolgt vom Nachweis mit einem Substratkomplex. Zusätzlich Immunoblot verwendet sowie zusätzliche Tests diagnostische Mittel zum Nachweis von anti-HCV gegen spezifische durch die verschiedenen Zonen von HCV RNA kodierten Antigenen [ „Spectrum 4“ ( „IMBIO“ Niznii Novgorod; RecombiBest Anti-HCV-SPECTRUM „- OOO“ Vector best "Novosibirsk, IFA-Anti-NSO-Spektr, NPO" Diagnosesysteme“, Nizhny Novgorod].

    Design und die Implementierung dieser Tests ist parallel mit der Einführung von Tests für Anti-HCV-Screening, das Wiederholen des Prinzips der Erweiterung des Spektrums von Peptiden in jeder nachfolgenden Generation von diagnostischen Mitteln eingesetzt. Somit unterscheidet sich das diagnostische RIBA-III von der vorherigen Generation durch die Zugabe eines Peptids, das durch die NS5-Zone kodiert wird. die Möglichkeit (in bestimmten Fällen) genauere Ergebnisse der enzymatischen Reaktion, indem sie mit einzelnen Peptiden als auch die Verwendung in einem Spreizspektrum diagnosticum Peptide reagieren, die in Screening-Assays nicht verwendet werden: Principles das positive Ergebnis der Detektion von anti-HCV enthält im Wesentlichen zu bestätigen. Nur die Einführung neuer Peptide erlaubt es, den diagnostischen Wert von Bestätigungstests zu erhöhen.

    Die Interpretation der Ergebnisse, die zum Beispiel in einem solchen Test wie RIBA-III erhalten werden, umfasst drei mögliche Antworten: ein positives, negatives und unbestimmtes Ergebnis. Letzteres wird erteilt, wenn keine eindeutigen Hinweise (gemäß den Anweisungen zum Diagnosekit) vorliegen, anhand derer das Vorhandensein oder Fehlen von Anti-HCV in der Testprobe eindeutig beurteilt werden kann. Die Korrelation des Spektrums der aufgezeichneten Antworten während der Bestätigungstests variiert in Abhängigkeit von den Merkmalen der Patientengruppen, bei denen primär HCV-Antikörper nachgewiesen werden [18]. Laut J.M. Pawlotsky et al. [19], in der Hälfte der Fälle, die als "vage" interpretiert werden, kann HCV-RNA nachgewiesen werden. Nach unserer Meinung ist die Gültigkeit der Antwort - "das vage Ergebnis des Nachweises von Anti-HCV", das der Laborarbeiter dem Kliniker gegeben hat, nicht nur bei der Durchführung des Bestätigungstests, sondern auch bei Routineuntersuchungen bezüglich des Vorhandenseins von Anti-HCV offensichtlich. Die Notwendigkeit einer solchen Interpretation der erhaltenen Ergebnisse spiegelt den aktuellen Stand der Labordiagnose von Hepatitis C wider.

    BESTIMMUNG VON IgM ANTI-HCV. Derzeit sind Diagnose-Kits für den Nachweis von IgM-Anti-HCV durch Unternehmen erstellt worden und werden hergestellt: "Vector Best"; "Diagnosesysteme"; "Imbio", "Abbott" usw. In der Entwicklungsphase der diagnostischen Kits wurden ELISA-Kits entwickelt, die auf Peptiden basieren, die von verschiedenen Regionen der HCV-RNA kodiert werden [20]. Die Auswahl wurde an dem durch die Core-Region der HCV-RNA kodierten Peptid und dem Nachweis von IgM-Antikörpern gegen diese gestoppt. Wie bei den Tests zum Nachweis von Anti-HCV (IgG) können falsch-positive Ergebnisse in der Studie von IgM anti-HCV aufgezeichnet werden. Laut Stevensona D.L. mit et al. [21], hatten bis zu 70% der Patienten mit chronischer Hepatitis C mit IgM-anti-HCV gleichzeitig einen erhöhten Rheumafaktor, der zum Auftreten falsch-positiver Ergebnisse beiträgt. Zur gleichen Zeit, nach Pawlotsky J. M., beeinflusst das Vorhandensein von Rheumafaktor nicht die Qualität des Nachweises von IgM Anti-HCV [22].

    BESTIMMUNG VON ANTIGENEN VON HCV. Die Möglichkeit, HCV-Antigene zu bestimmen, erregte die Aufmerksamkeit der Forscher unmittelbar nach der Entdeckung des Virus. Die theoretische Möglichkeit, sie zu testen wurde Krawczynski K. et al [23], die Immunhistochemie in Lebergewebe von HCV-Antigene gefunden, die Spezifität der Immunofluoreszenz glow demonstriert. Die Verwendung von poly- und monoklonalen Antikörpern gegen verschiedene HCV-Antigene hat die Anwesenheit von HCV-Core-Ag, Antigene codieren NS3 und NS4 Zonen HCV RNA im Zellkern und im Zytoplasma von Hepatozyten, in 60-90% der Patienten mit chronischer HS etabliert [24].Allerdings weitere Studien gezeigt haben, dass Antigene von HCV können in weniger als 5% der Leberzellen nachgewiesen werden.

    Die ersten diagnostischen Testsysteme ( "Ortho Antikörper gegen Core-Antigen (Murine Monoclonal) EL1SA Test System" und "Imucheck F-HCV-Core Kokusai Ag") zum Nachweis von HCV-Antigen auf dem Markt erschienen immunologischer Produkte 1999. Als objektives Erfassen Kern HCV-Antigen gewählt wurde, ist, dass auf Basis monoklonaler Antikörper konstruiert durch Festphasen-ELISA Ausführungsbeispiel bestimmt. Die ersten Untersuchungen über die Anwendung dieser Tests haben ihre hohe Sensitivität, Spezifität und vielversprechende Anwendungen identifiziert, in erster Linie in dem Dienst der Bluttransfusion [25,26]. Installiert:

  • die Möglichkeit, das Kern-Ag-HCV in Serum oder Plasma zu bestimmen;
  • Spezifität des Nachweises des Core Ag HCV;
  • Anwesenheit von Personen mit zirkulierendem Antigen in Blut, das für anti-HCV seronegativ ist;
  • häufiger (90,3%) Nachweis von Core Ag HCV im Blutserum mit Anwesenheit von Anti-HCV- und HCV-RNA [25];
  • eine direkte Korrelation zwischen der Konzentration von HCV-RNA und dem Nachweis von Core-Ag-HCV [25];
  • Reduzierung der Phase des "Fensters" - vom Zeitpunkt der Infektion bis zum ersten positiven Ergebnis des Nachweises von Anti-HCV. Es wurde festgestellt, dass das HCV-Core-Ag in 83% der Fälle (n = 24) am Tag nach dem ersten Nachweis von HCV-RNA [26] und lange (im Durchschnitt 26 Tage) vor dem Auftreten von Anti-HCV [27] nachgewiesen werden kann.

    Methoden zur Detektion von RNA HCV. Das moderne Stadium der Labordiagnostik der Hepatitis C kann als ein Stadium des Beginns der breiten Anwendung molekularbiologischer Methoden zum Nachweis von HCV-RNA charakterisiert werden. Die überwiegende Mehrheit der Methoden zum Nachweis von Nukleinsäuren wurde auf den Nachweis von HCV-RNA getestet. Die Prinzipien der Konstruktion von diagnostischen Präparaten und ihre Verwendung zum Nachweis von viraler DNA oder RNA sind einer beträchtlichen Anzahl von Literaturübersichten gewidmet, die sowohl in einheimischen [28] als auch in ausländischen Veröffentlichungen [29] veröffentlicht wurden. Alle diese Verfahren lassen sich in zwei Gruppen einteilen, die auf der Anwendung der Prinzipien der Hybridisierung ohne Amplifikation des ausgewählten Bereichs der Nukleinsäure oder mit deren Amplifikation beruhen, was das Auflösungsvermögen des Verfahrens wesentlich erhöht.

    Methode der Hybridisierung basierend auf der Kombination von markierten Hybridisierungssonden (genetisch manipulierte oder synthetische molekulare Strukturen, die zu selektierten RNA-Stellen komplementäre Nukleotidsequenzen enthalten). Die Ergebnisse werden durch die Intensität des Signals, das von der Markierung in der Zusammensetzung des gebildeten Komplexes kommt, berücksichtigt.

    Bei Hepatitis C fand diese Methode zum Nachweis von HCV-RNA vor allem in Hepatozyten ihre direkte Identifizierung in Tests, die als In-situ-Hibidisierung bezeichnet wurden [30]. Möglichkeit des direkten Nachweises von HCV-RNA im Gewebe erlaubte seine mononukleären Blutzellen, Zellen der Speicheldrüse und andere Gewebe des Körpers des Patienten mit Hepatitis-C [31,32] zu finden.

    Die Hybridisierungsmethode, die zum Nachweis von HCV-RNA verwendet wird, erlaubt es, die Anwesenheit von negativen (replikativen) Ketten von HCV-RNA zu zeigen, die eine aktive Replikation des Virus anzeigen [33].

    Die Methode der Polymerase-Kettenreaktion - derzeit die am weitesten verbreitete methodische Methode, die die Grundlage für fast alle molekularbiologischen Nachweismethoden von HCV-RNA bildet. Darüber hinaus ist die Bestimmung von HCV-RNA sowohl in qualitativer als auch in quantitativer Form möglich, was insbesondere für die Festlegung, Überwachung und Bewertung der Wirksamkeit der eingesetzten Therapie wichtig ist.

    Die Hauptvarianten der Methode können wie folgt identifiziert werden:

  • Polymerase-Kettenreaktion (PCR);
  • Ligasekettenreaktion;
  • NASBA;
  • TMA (Transkriptionsverstärkte Amplifikationsreaktion, Transkriptionsvermittelte Amplifikation).

    Polymerase-Kettenreaktion - weit verbreitet sowohl in Russland als auch im Ausland Methode zum Nachweis von HCV-RNA. Es basiert auf einem Mehrzyklus-Prozess, der an die natürliche Replikation von Nukleinsäure erinnert, wobei jeder Zyklus aus aufeinanderfolgenden Stufen besteht.

    Aus dem untersuchten Material (Blutserum oder -plasma, Leberbiopsie) wird HCV-RNA freigesetzt. Da HCV-Nukleinsäure repräsentiert durch RNA und cDNA-Molekül notwendig zu amplifizieren, unter Verwendung von Enzym - reverse Transkriptase, um die Bildung von einzelsträngigen Molekülen von HCV-cDNA. Im nächsten Schritt wird eine sogenannte "cDNA" zu einem spezifischen Abschnitt jeder der Ketten der HCV-cDNA hinzugefügt. Primer - kurze Oligonukleotide, komplementär zu bekannten Nukleotidsequenzen. Der Vergleich der Primärstruktur der 5'UTR-Region des Genoms von verschiedenen HCV-Isolaten ihre geringe Variabilität ergibt (zwischen Genotypen, einer Homologie von Nukleotiden, - 92-98% und 98-99% innerhalb von Genotyp). Dies machte es bevorzugt, Primer aus dieser HCV-RNA-Zone auszuwählen und sie in diagnostischen Testsystemen zu verwenden, die in unserem Land und im Ausland hergestellt wurden.

    Mit Hilfe des DNA-abhängigen DNA-Polymerase-Enzyms werden neue DNA-Abschnitte synthetisiert. Gegenwärtig wird das Bakterium Thermophilus termus (Tth-Polymerase) oder Thermophilus aquaticus (Taq-Polymerase) am häufigsten als Quelle dieses Enzyms verwendet. Mit thermischer Stabilität in Gegenwart von Mangan- und Magnesiumionen kann dieses Enzym gleichzeitig zur Synthese von komplementären einzelsträngigen HCV-cDNA-Molekülen und zur Amplifikation ausgewählter cDNA-Regionen verwendet werden. Im letzten Stadium eines einzelnen Reaktionszyklus synthetisiert die DNA-Synthese neue Ketten komplementärer HCV-cDNAs. Mehrere Wiederholungen des Zyklus Reaktion auf die Akkumulation von HCV-cDNA-Fragmenten führt, die durch visuelle Detektion gefolgt von mittels Polyacrylamidgelelektrophorese registriert sein kann, oder eine Hybridisierung mit Oligonucleotidsonden, die verwendet, um die Sensitivität und Spezifität von diagnostischen Produkten erhöht. Die Verwendung von mit Enzymen markierten Primern ermöglicht es, die Ergebnisse der PCR unter Verwendung eines Enzymimmunoassays aufzuzeichnen.

    Ein ständiges Ziel für Forscher, die diagnostische Systeme für den Nachweis von HCV-RNA entwickeln, ist eine Steigerung der Sensitivität und Spezifität. Diesem Zweck dient die PCR-Variante, die als "nested PCR" bezeichnet wird [34]. Ein charakteristisches Merkmal dieses Verfahrens gegenüber dem "klassischen" ist die gleichzeitige Verwendung von zwei Primerpaaren, von denen eines komplementär mit der inneren Region des Amplikons assoziiert ist, die nach der ersten Runde der Amplifikation erhalten wird. Gleichzeitig wird angenommen, dass diese Variante der PCR ein höheres Risiko einer Kontamination der Proben aufweist, was zu falsch positiven Ergebnissen führen kann [35].

    Der akute Bedarf an HCV-RNA-Bestimmung und die Komplexität, die mit der großtechnischen Herstellung von hochempfindlichen und spezifischen diagnostischen Kits für die PCR-Diagnostik verbunden sind, bestimmten den breiten Einsatz von in wissenschaftlichen Labors hergestellten Medikamenten. Ein Vergleich dieser Testsysteme, die sogenannten "In-House" -Tests, zeigten ihre hohe Variabilität in Sensitivität und Spezifität sowie die fehlende Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zwischen Laboratorien und einer Reihe von diagnostischen Arzneimitteln. So absolut in der Lage, das Vorhandensein oder Fehlen von viralen RNA in Kontrollproben während des ersten Zyklus der europäischen „externe“ Bewertung der Qualitätskontrolle von HCV-RNA (1996) 136 Laboratorien nur 22 (16%) [36] vorgesehen korrekt zu identifizieren. Ein ähnliches Ergebnis wurde in unserem Land, im selben Betrieb im Rahmen der Bund Externe Qualitätskontrolle (2001), als die 14 teilnehmenden Laboratorien nur 3 (21,4%) waren in der Lage, richtig zu lösen das Problem beobachtet. [37]

    Die Ursachen falsch-negativer und falsch-positiver Ergebnisse des HCV-RNA-Nachweises sind vielfältig. Mit falsch-negativen Ergebnissen:
    - Verlust oder Zerstörung von HCV-RNA in Vorbereitung auf die Reaktion von klinischem Material;
    - Vorhandensein in der Probe von Inhibitoren, die verschiedene Komponenten der PCR beeinflussen. Diese Inhibitoren werden durch verschiedene chemische oder proteinische Substanzen repräsentiert. Zum Beispiel: das Vorhandensein von Reverse-Transkriptase-Inhibitoren in der Spermienflüssigkeit erlaubte keinen Nachweis von HCV-RNA und sprach über die Möglichkeit, den sexuellen Übertragungsweg der Hepatitis-C-Übertragung zu implementieren [38]; das Vorhandensein von Hepaprin [39]; ein hoher Grad an Kryoglobulinen im Blutserum [40];
    - Nichteinhaltung des thermischen Regimes der Lagerung und des Transports von klinischem Material. Mit falsch positiven Ergebnissen:
    - Kontamination zwischen den Proben (bei Verarbeitung von Proben und / oder Arbeiten mit der Reaktionsmischung), einschließlich Kontamination mit einer positiven Kontrollprobe;
    - Kontamination durch Produkte vor der Amplifikation (Amplikons), die Testproben und Lösungen durch Aerosole oder Laborgeräte verunreinigen können.

    Die Masseneinführung der PCR-Diagnostik durch Definition der RNA von HCV hat die Einrichtungen der praktischen Gesundheitsversorgung in die Lage versetzt, auf eine neue Ebene der Durchführung von Laboruntersuchungen überzugehen. Isolierung von isolierten Zonen für die Hauptphasen der PCR (für die Probenvorbereitung, Amplifikation, um die Ergebnisse zu berücksichtigen); Ein separater Kit für jede Stufe der Reaktion von Laborkleidung, automatische Pipetten; Die Existenz von Standard-Diagnose-Kits und vor allem die Verfügbarkeit von hochqualifiziertem Laborpersonal ermöglicht es, die Anzahl der falschen Ergebnisse zu reduzieren.

    Das erste standardisierte Kit zur Bestimmung von HCV-RNA ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") wurde 1993 hergestellt. Im Laufe der Jahre haben sich Kits zum Nachweis von HCV-RNA entwickelt, deren Hauptzweck darin besteht, ihre Empfindlichkeit und Spezifität zu erhöhen. Bei der Entwicklung von "Amplicor TM HCV" werden verschiedene Methoden verwendet, mit denen 100 oder mehr HCV-RNA-Kopien in ml nachgewiesen werden können. Darüber hinaus werden mögliche Kontaminationen der im Kit verwendeten Proben und Lösungen bekämpft. Die Verwendung von Enzym-Amperase und Desoxyuridin-Triphosphat (dUTP) ermöglicht es, im ersten Amplifikationszyklus die vorhergehenden Anwendungen zu zerstören, die eine Kontamination verursacht haben könnten. Die Zerstörung der Amperase am Ende des ersten Amplifikationszyklus (bei + 55 ° C) erlaubt dem Enzym nicht, die als Ziele gewählten Amplicons zu zerstören. Eine wichtige Neuerung war die Einführung der internen Kontrolle. Die Bedeutung dieser Neuerung ist die Einführung einer Sequenz in jede Probe, die dem amplifizierten Abschnitt der HCV-RNA ähnlich ist, die anschließend durch die geeigneten Primer in der Amplifikationsreaktion auf ähnliche Weise nachgewiesen wird. Das Fehlen einer positiven Reaktion beim Nachweis der internen Kontrolle legt eine falsch-negative Reaktion auf die Anwesenheit von HCV-RNA in der Probe nahe. Diagnosticum der nächsten Generation war das Medikament "HCV Amplicor 2.0" mit einer Grenzempfindlichkeit von 50 HCV-RNA-Moleküle.

    Das System zum Nachweis von HCV-RNA unter Verwendung von Roche-Kits kann nicht isoliert von ihrer Instrumentierung betrachtet werden, was die hohe Qualität der Tests bestimmt. Die Entwickler des Verfahrens versuchten, alle Stufen der Reaktion vollständig zu automatisieren. Die Verkörperung dieser Idee ein System von „COBASAmpliPrepTM“ war, das vollständig ermöglicht, den Prozess der Extraktion von HCV-RNA, Amplifikation und Detektion zu automatisieren, wodurch das Risiko von falsch-positiven und falsch-negativen, zu reduzieren, während die hohe Empfindlichkeit und Spezifität beibehalten wird [41].

    Ligase-Kettenreaktion zum Nachweis von RNA-BGC (LCR). Das Verfahren beruht auf der Fähigkeit des Enzyms "DNA-abhängige DNA-Ligase", die Phosphodiester-Bindungsbrüche in DNA in Gegenwart von ATP und Mg 2+ -Ionen zu vernetzen (ligieren). Wie bei der "klassischen" PCR zum Nachweis von HCV-RNA ist die erste Stufe der LCR die reverse Transkription, um eine HCV-cDNA zu erhalten. Ferner bindet die DNA-Ligase zwei Paare von Primern (die komplementär zu der 5'-uncodierten HCV-RNA-Region sind), die weiter amplifiziert werden. Der Nachweis von LCR-Amplifikationsprodukten erfolgt unter Berücksichtigung der Antigen-Antikörper-Reaktion. Jeder der beiden Primer ist mit verschiedenen Hapten markiert. Die erste davon wird von Antikörpern aufgenommen, die auf Mikropartikeln adsorbiert sind. Nach dem Waschvorgang, unter Verwendung eines zweiten Paars von Antikörpern, die mit einer Fluoreszenzmarkierung markiert sind, wechselwirken sie selektiv mit dem Hapten in dem Amplifikationsprodukt, gefolgt von einer Substratreaktion und unter Berücksichtigung des Fluorimeters.

    Die Empfindlichkeit dieser Methode liegt bei etwa 200 Kopien der HCV-RNA in ml, wodurch sie zur Lösung verschiedener klinischer und diagnostischer Probleme verwendet werden kann [42]. Gegenwärtig werden von Abbott Diagnosesets zum Nachweis von HCV-RNA basierend auf LCR hergestellt.

    Nucleinsäure Sequencequenz Amplifikation - NASBA -Die Methode zum Nachweis von HCV-RNA beruht auf der gleichzeitigen Wirkung von drei Enzymen: der reversen Transkriptase des Vogel-Myeloblastom-Virus, der RNAsease H und der RNA-Polymerase T7 [43]. Im Gegensatz zur RT-PCR wird die reverse Transkription von HCV-RNA nicht in der ersten Stufe durchgeführt. Mit Hilfe der verwendeten Enzyme können mehr als 10 (9) Kopien der HCV-cDNA-Stelle innerhalb von 90 Minuten erhalten werden [44]. Die Fähigkeit, die Reaktion bei niedrigen Temperaturen (+41 ° C) durchzuführen, vereinfacht den Betrieb erheblich und erlaubt es, die Ausrüstung aufzugeben, die zyklische Änderungen bei hohen Temperaturen bereitstellt. Die Ergebnisse der Reaktion werden durch Elektrochemilumineszenz berücksichtigt. Trotz der Tatsache, dass die Empfindlichkeit von NASBA nahe bei RT-PCR liegt, wird die Methode nicht weit verbreitet zum Nachweis von HCV-RNA verwendet. Gegenwärtig wird eine Variante der Methode entwickelt, die die Prinzipien von NASBA und "Echtzeit-RT-PCR" kombiniert.

    Die Methode der transkriptionsvermittelten Amplifikation (TMA) unterscheidet sich von PCR und LCR primär dadurch, dass die HCV-RNA-Fragmente direkt amplifiziert werden, anstatt die HCV-cDNA. Im Anfangsstadium der Reaktion wird der Primer (Nr. 1) an die HCV-RNA angehängt und eine Kopie des Zielmoleküls, cDNA, wird mit Hilfe eines Enzyms (Reverse Transkriptase) synthetisiert. Die reverse Transkriptase, die ebenfalls die Aktivität von RNase-H aufweist, zerstört die virale RNA in dem RNA-cDNA-Hybrid. Als nächstes wird ein zweiter Primer an das cDNA-Molekül angeheftet, gefolgt von der Vervollständigung der doppelsträngigen DNA durch reverse Transkriptase. Unter Verwendung eines anderen Enzyms, der RNA-Polymerase, findet eine RNA-Transkription mit cDNA statt, was zur Bildung von 100 bis 1000 Kopien des Amplikons der HCV-RNA in einem einzigen Reaktionszyklus führt. Der Primer Nr. 2 wird an diese RNA-Bausteine ​​mit weiterer Synthese von cDNA-Kopien und Zerstörung des RNA-Moleküls angehängt. Die Zugabe von Primer Nr. 1 zu cDNA, gefolgt von der Vervollständigung der doppelsträngigen DNA, löst den nächsten Amplifikationszyklus aus. Die Ergebnisse der Reaktion werden auf dem Lumenometer berücksichtigt, da die gebildeten RNA-Amplicons spezifisch mit DNA-Sonden wechselwirken, die mit Chemilumineszenzmarkern markiert sind.

    Als Vorteile der TMA-Methode beim Nachweis von HCV-RNA wird festgehalten:

  • Reaktion bei niedrigeren Temperaturen im Vergleich zur PCR;
  • die Bildung einer größeren Anzahl von Amplicons in einem einzigen Reaktionszyklus, wodurch die für den Erhalt des Endergebnisses benötigte Zeit (30-40 Minuten) verkürzt und die Empfindlichkeit der Reaktion erhöht wird (50 Kopien / ml) [45].
  • Verringerung des Kontaminationsrisikos, da RNA weniger stabil ist als DNA.

    Vergleichende Untersuchungen zum Nachweis von HCV-RNA durch TMA und andere Methoden haben eine hohe Übereinstimmung der Ergebnisse gezeigt [45].

    Die Kombination der Prinzipien der Hybridisierung und Amplifikation unterliegt der Methode zum Nachweis von HCV-RNA, bezeichnet als Die Hybridisierungsmethode mit verzweigten Sonden oder Branched DNA Assay (bDNA) [46]. Im Gegensatz zu PCR in diesem Test umfasst die Amplifikation nicht die Moleküle der HCV-cDNA, sondern das Signal. Die Reaktion wurde in Platten mit 96 Vertiefungen durchgeführt, auf denen HCV-RNA-Fragmente von der 5'-untranslatierten Zone und HCV-RNA-Kern-Gen adsorbiert wurden. Durch anschließendes Binden an ein synthetisches verzweigtes DNA-Molekül und Hybridisierung mit einer mit alkalischer Phosphotase markierten Probe mit einem Enhancer und anschließender enzymatischer Reaktion wird eine starke Signalsteigerung erreicht. Die Diagnostik der dritten Generation (Bayer 3.0 Hepatitis-C-Virus-RNA-Quantifizierung durch bRNA) ist jetzt auf dem diagnostischen Markt, mit einer Sensitivität, die es ermöglicht, 520 IE / ml (2500 Kopien von HCV-RNA) nachzuweisen.

    Quantitative Detektion von HCV-RNA. Eine quantitative Variante der PCR wird verwendet, um die Konzentration von HCV-RNA zu schätzen. Zunächst versuchte die Konzentration von HCV RNA Ordinalwerte zu charakterisieren, wie „+“, „++“, usw., optisch reflektierende Intensität der durch Elektrophorese der Amplifikationsprodukte erhaltenen Banden oder durch limitierende Verdünnung, dh durch das Vorhandensein eines positiven Ergebnisses in den letzten Titrationspunkt. Schwierigkeiten bei der Standardisierung aller PCR-Stufen erlauben keine objektive Beurteilung der Konzentration von HCV-RNA, was zu erheblichen Fehlern bei der Interpretation der erhaltenen Ergebnisse führt.

    Derzeit sind die Ergebnisse der Studie in quantitativen Einheiten ausgedrückt: die Anzahl der Kopien von HCV-RNA in 1 ml., In absoluten oder logarithmischen Begriffen (log 10). Basierend auf der Tatsache, dass die Konzentration des HCV-RNA detektiert die Anzahl der Viruspartikel reflektiert wird diese Zahl als „Virus-Äquivalent (eq)“, mit dem Zusatz von prefix k (kilos Tausend) oder M (ppm). Eine andere Möglichkeit, die Anzahl der Viruspartikel auszudrücken, sind deren Gewichtsäquivalente. Zum Beispiel in Gramm oder Pikogramm (1 pg entspricht etwa 1 Million Äq.). Die Vielfalt der verwendeten Mengen erschwert die Interpretation der in verschiedenen Laboratorien erzielten Ergebnisse. Daher hat die WHO Expert Committee on Biological Standardization gemacht "eine internationale Referenzmaterial" enthält, HCV-RNA (liofilnovysushennaya Blutserum, das HCV-RNA-Genotyp 1), deren Konzentration in internationalen Einheiten (IU / ml) [47] ausgedrückt. Sonderfaktoren erlauben es, die erhaltenen Konzentrationswerte in internationale Einheiten umzurechnen.

    Fast alle Varianten der PCR werden verwendet, um die Konzentration von HCV-RNA zu bestimmen. Gleichzeitig werden eine Reihe spezifischer Anforderungen an diagnostische Arzneimittel gestellt, von denen das wichtigste die strikte Linearität der Ergebnisse ist, d.h. eine Zunahme des Signals der detektierten Reaktion mit einer Zunahme der Konzentration von HCV-RNA in der Testprobe. Die Verwendung interner Standards mit unterschiedlichem HCV-RNA-Gehalt vermeidet viele methodische Fehler, die das Endergebnis der Reaktion beeinflussen können [28]. Empfindlichkeit angewendet Diagnose (Amplicor HCV Monitor-v2.0; LCx HCV-RNA quantitativer Assay) HCV-RNA bei 50 Kopien pro ml Ausgangs [48.49] erkennen kann, was besonders wichtig ist die Wirksamkeit der antiviralen Therapie gewählt vorherzusagen.

    PCR in Echtzeit ("Echtzeit-RT-PCR") -eine der vielversprechendsten Optionen für eine quantitative Methode zum Nachweis von HCV-RNA. Die Methode und ihre Hardware werden gemeinsam von Spezialisten von Roche und Percin Elmer entwickelt. Das Prinzip des Verfahrens ist die Fähigkeit, cDNA-Sequenzen in Richtung 5 '- 3' zu hydrolysieren. Eine spezielle Sonde, die mit zwei Fluoreszenzfarbstoffen mit nahen Absorptions- und Fluoreszenzmaxima markiert ist, wird in der Reaktion verwendet. In Gegenwart von Amplifikationsprodukten spaltet die Tag-Polymerase die Sonde, was den Energietransfer von einem Molekül des Farbstoffs zum anderen verhindert und dadurch die Freisetzung eines Lichtquantums verhindert. Ein spezielles Gerät berücksichtigt die Reaktion und mathematische Modellierung der Fluoreszenzkinetik in jedem Stadium der Reaktion, wodurch Informationen über die Anfangskonzentration von HCV-RNA erhalten werden können.

    Informationen über das Vorhandensein von HCV-RNA direkt, Ein Unterscheidungsmerkmal von „real time PCR“ wird für möglich gehalten, während die Reaktion zu erhalten, also mit einer hohen Empfindlichkeit und der Linearität der Ergebnisse [50] kombinierten Testzeit zu reduzieren. Laut Tatiana Yashina und Mitautoren erlaubt diese Methode, 200 Kopien von HCV-RNA in ml nachzuweisen. [51].

    Methoden der Genotypisierung RNA VHC. Die Bestimmung der Zugehörigkeit von HCV zu einem bestimmten Genotyp und Subtyp hat seine Anwendung gefunden, um nicht nur rein wissenschaftliche, sondern auch praktische Probleme zu lösen. Zum Beispiel: Suche nach der Infektionsquelle bei Hepatitis-C-Ausbrüchen oder Vorhersage der Wirksamkeit der verwendeten Therapie.

    Der "Goldstandard" der HCV-Genotypisierung ist die direkte Bestimmung der Primärstruktur der HCV-RNA mit anschließender phylogenetischer Analyse [52], die es ermöglicht, dieses Isolat des Virus eindeutig zu charakterisieren. Sie können diese Informationen mithilfe der folgenden Sequenzierungsoptionen abrufen:

  • direkt;
  • basierend auf Standardklonen;
  • Sequenzierung von Produkten der PCR-Reaktion (limitierte Sequenzierung).
    Trotz der Genauigkeit des Ergebnisses wird die direkte Sequenzierungsmethode wegen der technischen Schwierigkeiten bei der Durchführung der Forschung und der hohen Kosten der Arbeit in der praktischen Gesundheitsfürsorge nicht verwendet. Gleichzeitig ist die Verfügbarkeit von Informationen über die Primärstruktur von HCV-RNA die Referenzmethode der Genotypisierung und die Verfügbarkeit von automatischen Sequenzierungsgeräten vereinfacht die Ergebnisse.

    Gegenwärtig werden in den meisten Fällen Verfahren, die auf der Verwendung von PCR mit typspezifischen Primern basieren, für die Genotypisierung von HCV-RNA verwendet. Die erste Genotypisierung von HCV-RNA wurde von N. Okamoto et al. 1992 mit RT-PCR [53] durchgeführt, die zwei Amplifikationsschritte umfasst. Der erste von ihnen wurde mit universellen Primern für alle HCV-Genotypen durchgeführt, der zweite mit einer Mischung von typspezifischen Primern, um spezifische Amplifikationsprodukte unterschiedlicher Länge zu erhalten. Die Anwesenheit eines bestimmten Genotyps wurde anhand der Größe des amplifizierten Produkts beurteilt. Als Primer werden typspezifische Sonden verwendet, Informationen darüber, welche sich in den 5'UTR-, Core- oder NS5-Regionen von RNKVS befinden [54].

    Hybridisierung der amplifizierten Produkte mit genspezifischen Sonden adsorbiert (aus dem nicht-translatierten Region von HCV-RNA 5‘), auf eine Nitrocellulosemembran adsorbiert wird, liegt an der Basis des Tests - bezeichnet‚INNO-LiPA HCV, INNO-genetics‘[55]. Mit Hilfe dieses Tests war es zunächst möglich, die Genotypen zu typisieren: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 und 5a. Zukünftig erlauben Testsysteme der zweiten Generation "INNO-LiPA HCV II, INNOGENETICS", alle 6 Genotypen und 2c zusätzlich zu unterscheiden; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a und 10a. [56]

    Das methodische Arsenal der HCV-Genotypisierung ist nicht auf die oben genannten Methoden beschränkt und umfasst eine Vielzahl von Methoden:

  • Genotypisierung basierend auf der Analyse der Restriktionsprofile von Amplifikaten (RFLP). Die Amplifikationsprodukte von HCV-RNA-Fragmenten (5'-UTR-Region oder NS5-HCV-RNA-Region) werden mit Restriktionsenzymen verdaut. Die gebildeten Fragmente variieren in der Länge, abhängig von den Restriktionsstellen, in denen sie gespalten sind. Die Ergebnisse der Elektrophorese und ihr Vergleich ermöglichen es, den HCV-Genotyp in der Testprobe zu identifizieren [57]. Ein Vergleich der Ergebnisse der Genotypisierung mit der PCR-RFLP-Methode mit Sequenzdaten ergab eine hohe Übereinstimmung der Ergebnisse - 95% [58].
  • Genotypisierung basierend auf der SSCP-Methode (Bewertung des konformationellen Polymorphismus einzelsträngiger DNA-Fragmente). Das Ziel der Untersuchung ist 5'-nicht-translatierten Region von HCV-RNA, ausgewählt, die eine minimale Menge von Nucleotidvariationen Genotypen hat, die sich voneinander unterscheiden. Diese Tatsache bestimmt die Möglichkeit, gemeinsame Primer für die Genotypisierung zu verwenden [59].

    SEROTYPING Anti-HCV Die Forschung hat dank P.Simmonds et al, stellen die Anwesenheit von Antikörpern gegen Epitope gerichtet genotipspetsifichnym welche Informationen codierten NS4 HCV RNA-Zone [60] hergestellt. Mit diagnosticum für ELISA konstruiert auf der Basis synthetischer Peptide, können Fälle von Hepatitis C unterscheiden, die durch Viren 1, 2 und Genotyp 3 (89% Übereinstimmung mit den Ergebnissen der Genotypisierung). Testsistem Entwicklung unter Verwendung von synthetischen und rekombinanten durch die NS4 codierten Antigene und die Kernzonen HCV RNA verbesserte die Liste typisierbarem Virusvarianten, und Richter Anwesenheit Subtypen (1a, lb, 2a, 2b, über, und 4a), [61,62]. Derzeit ist die kommerzielle Version von diagnostischen Zubereitungen zur Serotypisierung in der Ausführungsform des Punkt ELISA - "NA Mureh 1-6 Serotypisierung Assay, Murex Diagnostics", und in der Ausführungsform "Immunoblot" - RIBA HCV Serotypisierung Assay, Chiron Diagnostics. Vergleichende Daten der Serotypisierung und Genotypisierung von HCV-RNA zeigten eine hohe Übereinstimmung der Ergebnisse und erreichten 95% [62].

    Die Serotypisierung von Anti-HCV im Vergleich zur Genotypisierung von HCV-RNA hat solche Vorteile wie Einfachheit der Reaktion und niedrigere Kosten. Gleichzeitig kann diese Methode die Genotypisierung auf keinen Fall ersetzen. Die Ergebnisse der Serotypisierung von Anti-HCV zeigen den Typ von Anti-HCV in der aktuellen oder zuvor übertragenen Infektion an. In einigen Fällen (am häufigsten Bluter) aufgezeichnet gleichzeitigen Nachweis von verschiedenen anti-HCV-Subtypen, die mit einer Vielzahl von verschiedenen HCV-Genotypen und Subtypen [63] indikativ für eine Infektion sein können. Darüber hinaus kann bei Patienten mit Hepatitis C vor dem Hintergrund eines ausgeprägten Immunschwächezustands die RNA der einzige Marker sein, der eine Serotypisierung unmöglich macht.

    ERKENNUNG UND TRAKTION DER ERGEBNISSE DER PRÜFUNG DER SEROLOGISCHEN MARKER DER HCV-INFEKTION. Eine breite Palette von serologische Marker von aktuellen oder früheren HCV-Infektion sowie modernen methodischen Rahmen kann viele Probleme in der Labordiagnostik und Prävention von Tabelle Hepatitis C. 2 zeigt die Anzahl serologische Marker einer HCV-Infektion und die wichtigsten Bereiche ihrer Prüfung lösen.

    Tabelle 2
    Diagnostische Bedeutung von Markern aktueller oder früherer HCV-Infektion

    Screening
    im Dienst
    Blut

    Bestätigung
    die
    Ergebnis
    + Anti-HCV

    Eine der Hauptaufgaben der Labordiagnostik der Hepatitis C ist Diagnose und Trennung von akuter von chronischer Hepatitis C durch Identifizieren von serologischen Markern der Infektion. Wie bei anderen akuten viralen Hepatitiden treten serologische Marker der HCV-Infektion im Verlauf der Infektion und des Genesungsprozesses immer wieder auf und verschwinden (Abbildung 2).

    HCV-RNA kann am 7.-21. Tag nach HCV-Infektion und Anti-HCV am 20.-150. Tag (im Durchschnitt der 50. Tag) nachgewiesen werden [64]. Das Spektrum von Anti-HCV kann sich abhängig von der Dauer der akuten Hepatitis unterscheiden. Es wird angenommen, dass die ersten Antikörper, die von Core und NS5 durch die HCV-RNA-Region kodiert werden, nachzuweisen sind. Anti-HCV gegen Proteine, die von der NS4-Zone kodiert werden, ist in der akuten Phase der Hepatitis C nicht vorhanden [65]. Eine vergleichende Untersuchung des Niveaus der anti-HCV-Konzentrationen Spektrum anti-HCV und HCV-RNA bei Patienten mit akuter und chronischer Hepatitis zeigte einige Unterschiede. [66] Diese Unterschiede können unserer Meinung nach mit den individuellen Eigenschaften des infektiösen Prozesses in Verbindung gebracht werden, was ihren diagnostischen Wert verringert.

    Abb. 2. Akute Hepatitis C

    In Analogie zur Labordiagnose von Hepatitis A und B werden auf Antikörper gegen HCV-IgM-Klasse zu erwarten, so groß wie der diagnostischen Wert von IgM anti-HAV IgM und Anti-HBc wird. Jedoch sind diese Tests Seren von Patienten mit akuter und chronischer Hepatitis C in der Anwesenheit von IgM-anti-HCV ihrer häufigen Identifizierung bei diesen Patienten zeigen, - 50-93% bzw. 50-70%, jeweils [67,68], zeigen diese Ergebnisse, dass der Nachweis von IgM Anti -HCV kann nicht als Marker für eine akute HCV-Infektion verwendet werden.

    Das Fehlen eines Markers, der behauptet, der "Gold" -Standard der akuten Hepatitis C zu sein, bestimmt die Notwendigkeit einer umfassenden Bewertung der Ergebnisse, die auf der Grundlage einer dynamischen Beobachtung des Patienten erhalten werden.

    Ein ebenso wichtiges Einsatzgebiet für hochsensitive Methoden zum Testen von HCV-RNA - Verringerung des Risikos einer Posttransfusionshepatitis C. Der Bedarf für solche Arbeiten wird durch das Vorhandensein der "Fenster" -Phase bestimmt, d.h. die Zeit zwischen dem ersten Nachweis von HCV-RNA und das Auftreten von anti-HCV, sowie das Vorhandensein von Blutspendern (Patienten mit chronischer Hepatitis C), die HCV-RNA in Abwesenheit von anti-HCV haben. Das derzeitige System zur Überwachung von Blutspenden auf HCV beinhaltet nur die Testung von Anti-HCV, das Risiko, an Hepatitis C zu erkranken, besteht fort. Davon ausgehend ist es legitim, die Frage nach Blutuntersuchungen auf HCV-RNA mit modernen Methoden zu stellen (NAT-Methoden sind ein "Nukleinsäure-Amplifikationstest"). Der Faktor, der diese Arbeit begrenzt, ist der hohe Preis der Forschung. Um Kosten zu sparen, wird empfohlen, Blutserumpools (von 8 bis 96 Proben) mit der anschließenden Suche nach einer positiven Probe im Falle des Nachweises von HCV-RNA im Pool von Seren zu testen. Unter Berücksichtigung des Verdünnungsfaktors der gewünschten HCV-RNA, wenn Blutsera aufgebläht wird, wird die Frage der Verwendung der empfindlichsten Nachweismethoden von grundlegender Bedeutung. Es wird angenommen, dass die Verwendung von diagnostischen Kits für NAT - mit einer Sensitivität von 50-100 IE / ml das Risiko einer Hepatitis C nach Transfusion signifikant verringern kann.

    Zweifellos ist die Liste der Probleme, die beim Testen des gesamten Spektrums von HCV-Infektionsmarkern gelöst werden können, nicht auf diese beiden Bereiche beschränkt. Die Verfügbarkeit moderner Testmethoden in Verbindung mit der Kenntnis ihrer Fähigkeiten eröffnet eine breite Perspektive für die wissenschaftliche und angewandte Forschung zu Hepatitis C.

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